聊聊肉制品蛋白浓度的测定

导读:目前国产数一数二的定氮仪（也就是测量样品蛋白含量和氮含量的仪器）上海纤检仪器有限公司生产的KDN-103A和KDN-818全自动凯氏定氮仪是客户很认可的仪器，欢迎大家咨询购买上海纤检

来源：未知发布日期：2020-09-01 14:04【大中小】

上海纤检仪器有限公司目前有的定氮仪型号有：KDN-102A也就是对应以前的老型号上海纤检KDN-102C，KDN-103A也就是对应以前的老型号上海纤检KDN-103F，新款都有相对老款是有升级的，使用更方便，KDN-812定氮仪，上海纤检KDN-816定氮仪，上海纤检KDN-818全自动定氮仪。配套的消化炉有4孔、8孔、14孔、20孔等，客户可以根据自己的预算情况和使用情况配置相应的型号。下面简单介绍下猪外脊肉的蛋白浓度测定。内容仅供参考。
参照文献方法进行肌原纤维蛋白的提取。将冷冻肉放在4℃下静置12h进行解冻，用刀将猪外脊肉切成若干小条称量，放置于组织捣碎机中，加入4倍体积的僵直液（0.1mol/LNaCl，2mmol/L MgCl2，10mmol/L Na3PO4，1 mmol/LEGTA，pH值7.0），进行匀浆捣碎（15s，4次），离心15min（2000g，4℃），弃上层液，所得沉淀再次加入4倍体积的僵直液，重复上述步骤共3次。所得沉淀加入4倍体积的0.1mol/LNaCl溶液，搅拌均匀后经纱布过滤，使用0.1mol/L HCl将滤液的pH值调至6.25，离心，所得沉淀即为MP。全部提取过程保持在0~4℃，将所得蛋白置于离心杯中，保存于碎冰中，并保证在48h内使用。采用双缩脲法测定蛋白浓度。
肌原纤维蛋白-膳食纤维混合体系的制备：使用25mmol/LpH值6.2的磷酸盐缓冲液（含0.4mol/LNaCl）将MP蛋白膏稀释为45mg/mL，分别加入不同含量的ADF，用上述缓冲液对体系进行稀释，使得最终蛋白质量浓度为30mg/mL，ADF添加量（占蛋白质量分数）分别为0、1%、2%、3%、5%、10%、20%和50%，用玻璃棒轻轻搅拌均匀，将样品放置4℃储存12h。
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析（SDS-PAGE）：参照文献的方法，用25mmol/LpH值6.2的磷酸盐缓冲液（含0.4mol/LNaCl）稀释肌原纤维蛋白-膳食纤维混合体系，使其中蛋白最终质量浓度为2mg/mL，与等体积电泳样品稀释缓冲液混匀后，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析（SDS-PAGE）法分别在还原和非还原条件下对蛋白交联和聚集进行电泳分析，其浓缩胶和分离胶的质量分数分别为4%和12%，每孔上样量20μg。然后染色、脱色、拍照，并对电泳条带进行分析。
流变学性能的测定：根据文献方法进行动态流变学的测定。将样品混合物置于塑料离心管中离心脱气，将脱气后的样品置于流变仪平板之间，下压后轻轻拭去平板周围多余的样品，用硅油进行密封，防止水分的流失，平衡，在振荡模式下使样品以1℃ /min 的升温速率从20℃加热至75℃开始凝胶化。其震荡频率为0.1Hz，最大应力为0.02。记录实验中的弹性模量G′作为评价指标。
热诱导凝胶的制备：准确称取5g上述混合物样品置于小玻璃瓶中，封口，将其放置水浴锅中，以1℃/min的速度从20℃加热至75℃，且在75℃保温10min，取出后立即放置冰水浴中冷却30min，将所得凝胶于4℃冰箱中静置12h。测定凝胶性能前，需将凝胶样品在室温下平衡2h。
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导读:目前国产数一数二的定氮仪（也就是测量样品蛋白含量和氮含量的仪器）上海纤检仪器有限公司生产的KDN-103A和KDN-818全自动凯氏定氮仪是客户很认可的仪器，欢迎大家咨询购买上海纤检

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