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聊聊肉制品蛋白浓度的测定

导读:目前国产数一数二的定氮仪(也就是测量样品蛋白含量和氮含量的仪器)上海纤检仪器有限公司生产的KDN-103A和KDN-818全自动凯氏定氮仪是客户很认可的仪器,欢迎大家咨询购买上海纤检


返回列表 来源:未知 发布日期:2020-09-01 14:04【
上海纤检仪器有限公司目前有的定氮仪型号有:KDN-102A也就是对应以前的老型号上海纤检KDN-102C,KDN-103A也就是对应以前的老型号上海纤检KDN-103F,新款都有相对老款是有升级的,使用更方便,KDN-812定氮仪,上海纤检KDN-816定氮仪,上海纤检KDN-818全自动定氮仪。配套的消化炉有4孔、8孔、14孔、20孔等,客户可以根据自己的预算情况和使用情况配置相应的型号。下面简单介绍下猪外脊肉的蛋白浓度测定。内容仅供参考。
参照文献方法进行肌原纤维蛋白的提取。将冷冻肉放在4℃下静置12h进行解冻,用刀将猪外脊肉切成若干小条称量,放置于组织捣碎机中,加入4倍体积的僵直液(0.1mol/LNaCl,2mmol/L MgCl2,10mmol/L Na3PO4,1 mmol/LEGTA,pH值7.0),进行匀浆捣碎(15s,4次),离心15min(2000g,4℃),弃上层液,所得沉淀再次加入4倍体积的僵直液,重复上述步骤共3次。所得沉淀加入4倍体积的0.1mol/LNaCl溶液,搅拌均匀后经纱布过滤,使用0.1mol/L HCl将滤液的pH值调至6.25,离心,所得沉淀即为MP。全部提取过程保持在0~4℃,将所得蛋白置于离心杯中,保存于碎冰中,并保证在48h内使用。采用双缩脲法测定蛋白浓度。
肌原纤维蛋白-膳食纤维混合体系的制备:使用25mmol/LpH值6.2的磷酸盐缓冲液(含0.4mol/LNaCl)将MP蛋白膏稀释为45mg/mL,分别加入不同含量的ADF,用上述缓冲液对体系进行稀释,使得最终蛋白质量浓度为30mg/mL,ADF添加量(占蛋白质量分数)分别为0、1%、2%、3%、5%、10%、20%和50%,用玻璃棒轻轻搅拌均匀,将样品放置4℃储存12h。
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE) :参照文献的方法,用25mmol/LpH值6.2的磷酸盐缓冲液(含0.4mol/LNaCl)稀释肌原纤维蛋白-膳食纤维混合体系,使其中蛋白最终质量浓度为2mg/mL,与等体积电泳样品稀释缓冲液混匀后,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)法分别在还原和非还原条件下对蛋白交联和聚集进行电泳分析,其浓缩胶和分离胶的质量分数分别为4%和12%,每孔上样量20μg。然后染色、脱色、拍照,并对电泳条带进行分析。
流变学性能的测定:根据文献方法进行动态流变学的测定。将样品混合物置于塑料离心管中离心脱气,将脱气后的样品置于流变仪平板之间,下压后轻轻拭去平板周围多余的样品,用硅油进行密封,防止水分的流失,平衡,在振荡模式下使样品以1℃ /min 的升温速率从20℃加热至75℃开始凝胶化。其震荡频率为0.1Hz,最大应力为0.02。记录实验中的弹性模量G′作为评价指标。
热诱导凝胶的制备:准确称取5g上述混合物样品置于小玻璃瓶中,封口,将其放置水浴锅中,以1℃/min的速度从20℃加热至75℃,且在75℃保温10min,取出后立即放置冰水浴中冷却30min, 将所得凝胶于4℃冰箱中静置12h。测定凝胶性能前,需将凝胶样品在室温下平衡2h。
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